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ES打靶技術是一種基于胚胎干細胞（Embryonic Stem Cells, ES）同源重組的基因編輯方法，通過將外源DNA定點整合至基因組特定位置，實現基因敲除（KO）、條件性敲除（CKO）、基因敲入（KI）及點突變（PM）等精準修飾。其核心原理包括：
同源重組機制：
設計包含同源臂（與靶基因同源）的載體，通過同源重組將外源序列（如篩選標記基因）插入目標位點。
正負篩選系統(tǒng)：
正篩選標記（如Neo?）：插入同源區(qū)，篩選成功重組的ES細胞。
負篩選標記（如HSV-tk/DTA）：位于同源臂外側，淘汰隨機插入的細胞。
胚胎干細胞全能性：
修飾后的ES細胞注入囊胚，發(fā)育為嵌合體小鼠（F0），通過生殖系傳遞獲得穩(wěn)定遺傳模型。
技術定位：ES打靶是CRISPR前時代的金標準，尤其適用于大片段編輯（>10 kb）和復雜基因修飾（如條件性敲除）。
關鍵步驟解析：
載體構建：
同源臂長度通常為3-5 kb，大片段插入需BAC載體。
ES細胞系選擇：
常用品系：129S6/SvEvTac（高重組效率）、C57BL/6N（背景純凈）。
嵌合體制備：
囊胚注射后嵌合率約20-70%，需通過毛色標記（如白化宿主）直觀篩選。
EPS細胞（Extended Pluripotent Stem Cells）由我國科學家于2017年shou次報道，其優(yōu)勢包括：
效率提升：
打靶效率達傳統(tǒng)ES細胞的10-100倍。
周期縮短：
嵌合體一步獲得，省去3個月種系傳遞。
全能性增強：
單細胞注入囊胚即可生成100%嵌合體。
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